特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 彭氏變形菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Proteus penneri | 貨號 | YSP97105 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(TSLP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR,98% 畫眉草彎孢 5g L1-細胞粘附分子(L1CAM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 殼菌 1g 天冬酰胺合成酶(ASNS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽胞桿菌 250mg 白細胞彈性蛋白酶抑制因子(LEI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 紫紅曲霉 5g 蛋白酪氨酸酸酶受體G(PTPRG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% pBlueScript SK(+) 25ml 興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白1(EAAT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 馬賽菌屬 5ml 驅(qū)動蛋白家族成員5A(KIF5A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 狹霉素鏈霉菌 100g 驅(qū)動蛋白家族成員18A(KIF18A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 冷溫木拉克酵母 25g G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1(GPER)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 松口蘑 100g Bcl2相關(guān)髓細胞白血病序列1(MCL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大豆慢生根瘤菌 25g IgG-Fc片段結(jié)合蛋白(FcγBP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 腸球菌屬 500g 序列相似家族132成員A(FAM132A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 泡盛曲霉 25g 形成素結(jié)合蛋白1(FNBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 泡菜大洋芽胞桿菌 5g 肌脂蛋白(SLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 假單胞菌 250mg D-多巴色素變位酶(DDT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 秀珍菇 1g 歸巢關(guān)聯(lián)細胞黏附分子(HCAM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 250mg 鈣網(wǎng)蛋白(CRT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 氣微菌 1g 鈣腔蛋白(CALU)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g 彭氏變形菌探針法熒光PCR檢測試劑盒松果體N甲基酰羥色抗體CASP4(Caspase-4) 半胱酸蛋白酶蛋白-4抗原1 ml 短鏈脫氫還原酶1抗體Trk B 神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原)5 ml DNAJC7蛋白抗體Trk B 神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原)1 Kit 動力結(jié)合蛋白DNMBP抗體Trk C 神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原)1 ml 白喉酰生物合成樣蛋白2抗體TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT) 促甲狀腺素受體(抗原)100 ul Notch信號通路Delta樣配體3抗體Caspase-8 (pro Mch5) 半胱氨酸蛋白酶8抗原1 ml 動力蛋白激活蛋白2抗體TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(CT) 促甲狀腺素受體(抗原)5 ml 視神經(jīng)細胞相關(guān)蛋白/早老素結(jié)合蛋白抗體TY3H ( Tyrosine Hydroxylase ) 酪氨酸羥化酶(抗原)1 ml DHX螺旋酶抗體Tubulin-Alpha 微管蛋白(抗原)1 Kit |