熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 貓免疫缺陷病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Feline Immunodeficiency Virus （FIV） | 貨號 | YSP96716 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
表沒食子兒茶素PDI (C81H6) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)3,二氫-2H-吡喃-2-甲 表兒茶素沒食子酸酯Drebrin (pan) AntibodyN-乙基嗎啉 萊苞迪甙AArgonau 1 (D84G10) XP® Rabbit mAb溴-甲 萊苞迪甙A（標準品）Argonau 1 (D84G10) XP® Rabbit mAb酮縮甘油 環亮氨酸甲酯鹽酸鹽Argonau 3 (D15D2) Rabbit mAb氟芐 水溶性四氮唑-3LRF/Pokemon (D7U2O) Rabbit mAb間甲 三溴新戊Phospho-Akt (Thr308) (C31E5E) Rabbit mAb (Biotinylad)2-基吡啶 水溶性四氮唑-1β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Biotinylad)氟-甲 Tris HCl；三羥甲基氨烷鹽酸鹽NPC1L1 Antibody1-(2-甲氧基基)哌鹽 Tricine；三(羥甲基)甲基甘氨酸Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-溴-甲酸甲酯 三(羥甲基)甲基甘氨酸（標準品）α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)三異丁基鋁 SAR245409 (XL765)RKIP (G38) Antibody亞碲酸鈉 3,3',5,5'-四甲基聯(TMB) HO-1 (P249) Antibody氯化鎘 S. Na;2-[(三(羥甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸鈉α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)5-甲基色鹽酸鹽 S；Tris乙磺酸,2-[（三（羥甲基）甲基）氨基]-1-乙磺酸S100A1 Antibody氯化亞汞 [ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基磺酸鈉Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)亞硫酸 TAPSO；[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基磺酸HCFC1 Antibody (Carboxy-rminal Antigen)DL-高氨酸 N-三(羥甲基)甲基-氨基磺酸鈉ELP1/IKBKAP Antibody乙酰基酸
貓免疫缺陷病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒水解酶結構域蛋白15抗體Calpain 1/FITC 熒光素標記鈣蛋白酶抗體IgG100 ul 肺α/β水解酶蛋白3抗體Calpain 2/FITC 熒光素標記鈣蛋白酶2抗體IgG100 ul 三酸腺苷結合盒轉運蛋白F亞基3抗體Calponin 1/FITC 熒光素標記鈣調節蛋白-1抗體IgG100 ul 三酸腺苷結合盒轉運蛋白A亞基5抗體Camk1g/FITC 熒光素標記鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激酶IG抗體 IgG100 ul ADCK1蛋白抗體CaMK2a/FITC 熒光素標記鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2α抗體IgG100 ul 酰基輔酶A結合結構域蛋白4抗體CaMK2b/FITC 熒光素標記鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2b抗體IgG20 ul α/β水解酶4抗體CANX/FITC 熒光素標記抗鈣連蛋白抗體IgG100 ul ADCK2蛋白抗體ISR- Alpha/RBITC 紅色熒光素羅丹明標記(RBITC)胰島素受體-α抗體IgG(標記抗體)300 ul 乙脫氫酶16家庭A1抗體CAP2/FITC 熒光素標記環化酶相關蛋白CAP-2抗體IgG100 ul |
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