產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱:人皰疹病毒型通用PCR檢測試劑盒 英文名稱:Human Herpesvirus6(HHV6)6PCR 編號:HE31095-R 類別:PCR檢測試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 ? 儲需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 EEM培養(yǎng)基/EEM Medium 包裝;5g 胰蛋白胨膽鹽瓊脂/Tryptone Bile Agar 包裝;100g 膽鹽七葉苷瓊脂/Bile Esculin Agar 包裝;25g 七葉苷培養(yǎng)基/Esculin Medium 包裝;500g VRBG瓊脂/結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂/VRBGA/Violet Red Bile Glucose Agar/VRBG Agar 包裝;100g 哥倫比亞CAN瓊脂基礎(chǔ)/Columbia CAN Agar Base 包裝;1g M-FC瓊脂/濾膜糞大腸菌瓊脂/M-FC Agar 包裝;25g M-FC肉湯/濾膜糞大腸菌肉湯/M-FC Broth 包裝;5g 肉浸液瓊脂/Meat Infusion Agar 包裝;100ml 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基/西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂/Simmons Citrate Agar 包裝;25ml 克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基/Christensen Citrate Medium 包裝;500ml 乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基/Lactose Bile Broth 包裝;100g 乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基/乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基/乳糖復(fù)發(fā)酵管培養(yǎng)基/乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基/乳糖復(fù)發(fā)酵胨/Lactose Ferment Broth 包裝;25g 鹽胱氨酸增菌液/SC增菌液/SC肉湯/Selenite Cystine Broth 包裝;100g 鹽增菌液/SE增菌液/SE培養(yǎng)基/Selenite Enrichment Medium 包裝;25g 煌綠瓊脂/亮綠瓊脂/Brilltant Green Agar 包裝;100ml 煌綠增菌液/亮綠增菌液/亮綠肉湯/Brilltant Green Enrichment Broth 包裝;25ml 人皰疹病毒型通用PCR檢測試劑盒Microvirga│sp. 中文名稱:微小桿菌種屬:Microvirga│sp.分離基物:土壤提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:820生長條件:30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98% Pseudomonas│oleovorans 中文名稱:食油假單胞菌種屬:Pseudomonas│oleovorans分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:可用于對烴的降解研究培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長條件:37℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Microbacterium│arborescens 中文名稱:樹狀微桿菌種屬:Microbacterium│arborescens分離基物:土壤/樹林表層土提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:微生物/土壤耐鹽菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:1001生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Microbacterium│imperiale 中文名稱:蛾微桿菌種屬:Microbacterium│imperiale分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:生物活性微生物/抗腫瘤活性培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:12生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Rhodotorula│glutinis var. salinaria 中文名稱:粘紅酵母種屬:Rhodotorula│glutinis var. salinaria分離基物:生物樣/老鼠簕提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:近海酵母培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法 純度:98% Psychrobacillus│sp. 中文名稱:嗜冷芽孢桿菌種屬:Psychrobacillus│sp.分離基物:沉積物/深灰色微黃沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:極地細(xì)菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長條件:15℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Pseudoalteromonas│sp. 中文名稱:假交替單胞菌種屬:Pseudoalteromonas│sp.分離基物:沉積物/近海沉積物提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:1001生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97% 純度:97% 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |