PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 產(chǎn)品名稱 | 巨睪前殖吸蟲探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Prosthogonimus macrorchis | 貨號(hào) | YSP97103 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 泛素交叉反應(yīng)蛋白(UCRP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 1g 細(xì)胞球蛋白(CYGB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 馬腸鏈球菌 25g 內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(ESAM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 木蹄層孔菌 5g Epigen蛋白(EPG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 蘇云金芽孢桿菌 5MG 雙氫睪酮(DHT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 弗雷德里克斯堡假單胞菌 1g 甘露糖受體C2(MRC2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 陰溝腸桿菌 250mg 防御素β103B(DEFβ103B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 5g 血小板激活因子(PAF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >97.0%(GC) 漢塔成對(duì)桿菌 25g 肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >97.0%(GC) 紡錘狀鏈霉菌 5g 脫氫酶(XDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 稻平臍蠕孢 100g 白介素1η(IL1η)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 貝酵母 25g 卷曲同源物6(FZD6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 伯克霍爾德氏菌屬 5g 富酪蛋白(STATH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97%,ee值>98% 釀酒酵母 1g 整合素α1(ITGα1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97%,ee值>98% 枯草芽孢桿菌 5g 細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 厚孢根霉 1g CD200受體1(CD200R1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g 二酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移酶同源物1(DGAT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% Hymenobacter 5g Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 瑞士乳桿菌 250mg 巨睪前殖吸蟲探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒脫酸輔酶A結(jié)構(gòu)域蛋白抗體Camk1g(Calcium/calmodulin dependent proin kinase IG) 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗原100µl DCST1蛋白抗體TGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1) 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β1(抗原)1 ml DCUN1D4蛋白抗體CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent proin kinase II beita) 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗原400 ul 脫氧輔合酶蛋白抗體CAP1/Park7/DJ-1 Park7/DJ-1/CAP1抗原1 ml 短鏈脫氫酶/還原酶家族4樣2蛋白抗體CAP2(Adenylyl cyclase-associad proin 2) 環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗原100 ul DDRGK1蛋白抗體TGF- Beta2 (Ttansforming Growth Factor – Beta2) 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β2(抗原)1 Kit DENND2A蛋白抗體TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3) 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β3(抗原)100 ul DENND1B蛋白抗體TGF- Beta R2 peptide 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體2(多肽抗原)100 ul DEPTOR蛋白抗體Thymosin Alpha-1 胸腺肽 α-1 (胸腺肽-Thymosin alpha-1)100 ul |