特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 文氏密螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Treponema vincentii | 貨號 | YSP97287 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 石蠟切片組織CASPASE-1蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 FOXO6 ELISA Kit 100 ul 載玻片細(xì)胞CASPASE-1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 FOXP1 ELISA Kit 100 ul 冰凍切片組織CASPASE-1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 FOXP2 ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織CASPASE-1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 FNTB ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞CASPASE-1蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒 FOSL2 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞CASPASE-1蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 FN3K ELISA Kit 100 ul CASPASE-1蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 FIP1L1 ELISA Kit 100 ul CASPASE-1蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 FIGNL1 ELISA Kit 20 ul CASPASE-1蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 FIS1 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞CASPASE-2蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 FGFBP2 ELISA Kit 350 ul 載玻片細(xì)胞CASPASE-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 FKBP10 ELISA Kit 1 Kit 冰凍切片組織CASPASE-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 FKBP1A ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織CASPASE-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 FKBP14 ELISA Kit 100 ul 載玻片細(xì)胞CASPASE-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 FGFR1OP ELISA Kit 100 ul 冰凍切片組織CASPASE-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 FGFBP3 ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織CASPASE-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 FNDC3A ELISA Kit 100 ul 文氏密螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒G氨基丁酸A型受體α2/GABAA Rα2抗體OX-B(Human Orexin B) ELISA Kit 食欲素/阿立新B100 ul G氨基丁酸A型受體α4/GABAA Rα4抗體DSIP(Human delta sleep-inducing peptide) ELISA Kit 促睡眠肽20 ul G氨基丁酸A型受體α6/GABAA Rα6抗體6-OHDA(Human 6-hydroxydopamine) ELISA Kit 6-羥多巴100 ul 酸化γ1氨基丁酸受體GABAA Rβ1抗體ANF(Human atrial natriuretic factor) ELISA Kit 心納素100 ul G氨基丁酸受體β2/GABAA Rβ2抗體p2(Human myelin proin 2) ELISA Kit 神經(jīng)髓鞘蛋白100 ul G蛋白偶聯(lián)受體17抗體AVP(Human arginine vasopressin) ELISA Kit 精氨酸加壓素200 ul G蛋白偶聯(lián)受體102抗體PACAP(Human pituitary adenyla cyclase activating polypeptide) ELISA Kit 垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽300 ul G蛋白偶聯(lián)受體136抗體MAP-2(Human microtubule-associad proin 2) ELISA Kit 微管相關(guān)蛋白2100 ul G蛋白偶聯(lián)受體126抗體NF(Human neurofilament proin) ELISA Kit 神經(jīng)絲蛋白100 ul |