客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 鰓霉屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Branchiomyce spp. | 貨號 | YSP96473 |
熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 甲合次硫酸氫鈉(>98%,BC)Phospho-BMAL1 (Ser42) Antibody2-氯-氟 酸性品紅鈣(>60%,BS)Symmetric Di-Methyl Histone H3 (Arg8) (E1W5H) Rabbit mAb(2-羥基)酸 加拉銨(>98%,BR)Acetyl-Histone H4 (Lys12) (D2W6O) Rabbit mAb氧化乙 D-氨基葡萄糖硫酸鈉鹽INTS9 Antibody氯氫醌 葡萄糖-6-酸脫氫酶Na Channel β1 Subunit (D4Z2N) Rabbit mAb嗎啉乙酸鹽酸鹽 戊二酸(>98%,BR)Prestained Proin Marker4'-氟-2-羥基乙酮 戊二酸酐(>96%,BR)Prestained Proin Marker2-氯-4,6-二基嘧啶 三醋酸甘油酯(>98%,BR)Prestained Proin Marker7-溴-1H-吲唑 甘氨酸鈉(>98%,BR)DEK (E1L3V) Rabbit mAb甲基吡啶-N-氧化物 乙酸(>98%,BR)Na Channel β2 Subunit (D6L5Y) Rabbit mAb1-乙基環(huán)戊 硬脂酸單甘油酯(>98%,BR)Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAbN-[基-(三氟甲基)基]甲基環(huán)氧酰 氯化金Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb(2S)-(+)-縮水甘油基對甲磺酸酯 石墨粉(>99%,BR)LMAN1 (E2B6H) Rabbit mAb硝基-溴 硝酸胍(分子生物學(xué)級)MDR1/ABCB1 (E1Y7S) Rabbit mAb溴丁 己二(>98%,BR)Claudin-1 (D3H7C) Rabbit mAb2-基-4,5-咪唑二羧酸二甲酯 六甲基酰三(>98%,BR)Viperin (D5T2X) Rabbit mAbN-乙基正丁 還原茚三酮二水合物(>98%,BR)Acetyl-Histone H3 (Lys18) (D8Z5H) Rabbit mAb6-乙氧基-2-巰基并噻唑 (>40%,BC)Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-氟芐基肼 鰓霉屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒富組氨酸糖蛋白(HRG)ELISA試劑盒HBA1/Alpha globin 血紅蛋白α1抗體100 ul 富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA試劑盒hHb 血紅蛋白單克隆抗體100 ul 富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61/CCN1)ELISA試劑盒HBsAg 乙肝表面抗原抗體100 ul 副腫瘤性天皰瘡(PNP)抗體ELISA試劑盒HBsAg 乙型肝炎表面抗原單克隆抗體(檢測)100 ul 復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒HBcAg 乙型肝炎核心抗原單克隆抗體100 ug 附睪蛋白4(HE4)ELISA試劑盒HBeAg(1) 乙肝e抗原抗體(1)100 ul 輔酶Q10(CoQ10)ELISA試劑盒HBeAg(2) 乙型肝炎e抗原單克隆抗體(2)100 ul 脯氨酸肽酶(PEPD)ELISA試劑盒VWCE VWCE抗體100 ul 脯氨酸羥化酶(PHD)ELISA試劑盒VWCE VWCE抗體100 ul 實(shí)驗(yàn)過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 |