特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 雞附紅細胞體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Eperythrozoon gallians | 貨號 | YSP96676 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 環(huán)索奈德(標準品)Anti-rat IgG (H+L), (Alexa Fluor® 488 Conjuga) 噻吩-2-碳酸酯 羅漢松脂素,羅漢松脂酚Anti-rat IgG (H+L), (Alexa Fluor® 555 Conjuga) 甲基酸 酪氨酰氨Anti-rat IgG (H+L), (Alexa Fluor® 647 Conjuga) 間 皂素;茶皂素NAC1 Antibody (Human Preferred)DL-蘋果酸 炔諾酮(標準品)Paip2A Antibody芐基氯化鎂 炔諾酮CBX4 Antibody1,3二氯-1,1,3,四異基二硅氧烷 (標準品)FIH (D19B3) Rabbit mAb十二烷二酸 (美國進口)ACAT1 Antibody1-溴壬烷 柳酚,利膽酚(標準品)Oct-1 Antibody溴-1,二甲酸 柳酚,利膽酚Phospho-A-Raf (Ser299) Antibody1-溴-氯丁烷 甲磺酸瑞波西汀Phospho-A-Raf (Ser299) Antibody氨基-2-氟三氟甲 酮色林,凱他色林A-Raf AntibodyD-(-)-對羥基甘氨酸鄧鹽 酮色林,凱他色林(標準品)A-Raf Antibody氟吡啶 章鹽酸鹽;正辛弗林CD3 (UCHT1) Mouse mAb (redFluor™ 710 Conjuga)氧化-甲基嗎啉一水合物 舒林酸CARD11 (1D12) Rabbit mAb(溴基)乙炔 舒林酸(標準品)CaMKII (pan) (D11A10) Rabbit mAb(R)-(+)-2-溴-α-甲 托品酸(標準品)TWEAK Antibody(R)-1-Boc-羧基吡咯烷 α-酮戊二酸(標準品)PRMT4/CARM1 Antibody1-(2-氨乙基)吡咯烷 雞附紅細胞體探針法熒光PCR檢測試劑盒裸鼠ELISA試劑盒5-HTR1A/FITC 熒光素標記5-羥色受體1A抗體IgG100µl 裸鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒5-HTR1B /FITC 熒光素標記5-羥色受體1B抗體IgG300 ul 裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒5-HTR2A/FITC 熒光素標記5-羥色受體2A抗體IgG100 ul 裸鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒5-HTR2B/FITC 熒光素標記5-羥色受體2B(5-HT/serotonin R2B)抗體IgG20 ul 驢ELISA試劑盒5-HTR3/FITC 熒光素標記5-羥色受體3抗體IgG100 ul 驢孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒5-HTR4/FITC 熒光素標記5-羥色受體4抗體IgG100 ul 驢透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒5-LOX/FITC 熒光素標記5-脂氧合酶抗體IgG100 ul 驢卵泡刺激素(FSH)ELISA試劑盒Phospho-5-Lipoxygenase (Ser271) /FITC 熒光素標記酸化5-脂氧合酶抗體IgG100 ul 驢黃體生成素(LH)ELISA試劑盒Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663) /FITC 熒光素標記酸化5-脂氧合酶抗體IgG20 ul |