熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 歐洲放線菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Actinomyces europaeus | 貨號(hào) | YSP96339 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 實(shí)驗(yàn)過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 奈拉濱C45H53NO142,6-二氯-吡啶酸 醋酸奈西立肽C21H20O62-氨基-3,二甲基吡啶 硫酸奈替米星C32H34O101-乙基萘 硫酸奈替米星(標(biāo)準(zhǔn)品)C19H20O32-氟-甲基吡啶-5-酸 制霉菌素C41H64O143,6-二氯-4,5-二甲基噠 奧氮平C45H72O17氯-2-氟三氟甲苯 奧氮平(標(biāo)準(zhǔn)品)C20H24O4(S)-氨基哌啶雙鹽酸鹽 鹽酸昂丹司瓊C16H12O52,二溴噻吩 鹽酸昂丹司瓊(標(biāo)準(zhǔn)品)C20H20NO42-嘧啶 奧硝唑C24H32O4反-2-甲基-2- 奧硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品)C27H22O122,二氯-3,5-二硝基三氟甲苯 奧沙利鉑C21H20O105-二甲氨基-1-萘磺酸 奧沙利鉑(標(biāo)準(zhǔn)品)C10H12O2-溴-酚 硝酸奧昔康唑C19H19N7O6(R)-1-N-Boc-2-甲基哌 鹽酸土霉素C16H18O66-溴-2-氯喹啉 鹽酸土霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)C26H20O10溴-2-氟苯磺酰胺 縮宮素,醋酸催產(chǎn)素C15H10O6氟-氯苯乙酮 紫杉C21H20O10叔-丁基-2-氯苯酚 歐洲放線菌探針法熒光PCR檢測試劑盒鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒beta-Amyloid(31-35) β淀粉樣肽(31-35)抗體100 ul 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體100 ul 糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體100 ul 糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒beta-Amyloid(25-35) β淀粉樣肽(25-35)抗體20 ul 糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒beta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)抗體100 ul 糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉樣肽1-40(C端)抗體100 ul 糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉樣肽 1-40 (C端)抗體100 ul 糖皮質(zhì)類固受體(GR)ELISA試劑盒beta-Amyloid(1-42) β淀粉樣肽(1-42)抗體20 ul 糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA試劑盒Angiopoietin 1 血管生成素-1抗體500 ul |