特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 羅布羅布芽生菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Loboa lobai | 貨號 | YSP96890 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 4,4'-二酰氧基聯(lián)(>99.0%(GC))6,7-二甲氧基-1,2,3,四氫異喹啉 3,3'-二羥基聯(lián)(>99.0%(T))6,7-二甲氧基-3,二氫異喹啉 4,4'-二甲氧基八氟聯(lián)(>98.0%(GC))溴靛紅酸酐 雙[(二甲氨基)基](>98.0%(GC)(T))溴基四氫吡喃 4,4'-二羥基二烷(>99.0%(GC))5,6-二-2-吡啶甲酸 4,4'-雙馬來酰亞基二(>96.0%(GC))5-氨基-1,2,3,四氫異喹啉 雙(氨基-2,二)(>90.0%(T))5-氨基-1,2,3,四氫異喹啉鹽酸鹽 雙(基-5-甲基-馬來酰亞基基)(>98.0%(N))8--5-氨基喹啉 4,4'-二硝基二烷(>99.0%(GC))5-氟喹啉 4,4'-二異酸二(>97.0%(T))5-甲基煙酸酯 3,3'-二氨基二(>98.0%(T))5-甲氧基吡啶- 3,4'-二氨基二烷(>98.0%(GC)(T))5-甲氧基喹啉 4,4'-二氟二(>99.0%(GC)5-甲氧基異喹啉 2,2'-二羥基二(>99.0%(GC)5-喹啉甲酸甲酯 2,4'-二羥基二(>98.0%(GC))喹啉-5-甲酸酯 4,4'-二氨基-3,3'-二甲基二(>95.0%(T))5--1,2,3,四氫異喹啉 4,4'-二羥基四(>98.0%(GC))5--1,2,3,四氫異喹啉鹽酸鹽 4,4'-亞甲基雙(2,6-二叔丁基酚)(>98.0%(GC))羥基喹啉-甲酸 羅布羅布芽生菌探針法熒光PCR檢測試劑盒CD40L抗體Phospho-MKP1 (Ser359)/FITC 熒光素標記酸化絲裂原活化蛋白激酶酸酶-1抗體IgG20 ul α-s1酪蛋白抗體Phospho-MKP1 (Ser296 + Ser318)/FITC 熒光素標記酸化絲裂原活化蛋白激酶酸酶-1抗體IgG100 ul CIDEB抗體MKP-2/DUSP4/FITC 熒光素標記絲裂原活化蛋白激酶酸酶-2抗體IgG20 ul 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體MLK3 /FITC 熒光素標記絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MLK3抗體IgG1 Kit 信號轉導蛋白亞基7A抗體Phospho-MLK3 (Thr277/Ser281)/FITC 熒光素標記酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MLK3抗體IgG500 ul 細胞凋亡抑制因子抗體MLCK/FITC 熒光素標記肌球蛋白輕鏈激酶抗體IgG100 ul D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體Myosin Phosphatase/FITC 熒光素標記肌球蛋白酸酶抗體IgG100 ul 降鈣素抗體Phospho-MYPT1 (Ser507)/FITC 熒光素標記酸化肌球蛋白酸酶抗體IgG20 ul 20號染色體開放閱讀框14抗體Phospho-MYPT1 (Ser668) /FITC 熒光素標記酸化肌球蛋白酸酶抗體IgG500 ul |