樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 豬痢疾短螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Brachyspira hyodisenteriae | 貨號 | YSP96471 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 馬來酸二甲酯(>98%,BR)Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-甲酸乙酯吡啶 草酸二甲酯(>98%,BR)Cell Health Assay Kit5-溴-甲基-1H-吲唑 丁二酸二甲酯(>99%,BR)IL-17A (D1X7L) Rabbit mAb (Mouse Specific)氨基-甲酸甲酯 二甲酮鈉鹽(>97%,BR)SimpleChIP® Human FDPS Promor Primers2-乙 N,N-二異基乙(>98%,BR)Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)甲酸甲酯甲酯 二烷(>98%,BR)p130 Cas (E1L9H) Rabbit mAb2 2'-聯嘧啶 二甲(>98% (HPLC),BR)DNA Polymerase η (E1I7T) Rabbit mAb氯-氟 直接藍71(≥50%,BR)Phospho-ATF-2 (Thr71) (11G2) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-氨基-6-氯-酚 天狼猩紅UNC5B (D9M7Z) Rabbit mAb2-溴-4,5-二甲氧基甲酸 DL-2氨基丁酸(>98.5%,BR)PGRMC1 (D6M5M) XP® Rabbit mAb2-咪唑烷酮 DL-2-哌啶羧酸(>98%,BR)PGRMC1 (D6M5M) XP® Rabbit mAb乙二四乙酸鋅鈉鹽 DL-甘氨酸(>98%,BC)Phospho-PI3 Kinase Class III (Ser249) Antibody溴-5-硝基-2-羥基吡啶 DL-beta-氨酸(>98%,BR)Cellular Glutathione Dection Assay Kit1-(甲氧基-(甲氧基氧基)基)-甲基-1-丁酮 DL-肉鹽酸鹽LARS Antibody2,5-二溴對二甲酸二乙酯 DL-鳥氨酸鹽酸鹽(>98%,BC)c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)氯-2-(2-氯-5-氨基-氧基)-5-三氟甲基吡啶 DL-(>99%,BP)Phospho-SSH3 (Ser37) Antibody2-溴-5-甲 甲基酸二甲氨乙酯(>99%,BR)VAMP7 (D8Y1R) Rabbit mAb (IF Specific)2-酸環己基酯 D-蘋果酸(>98%,BR)Rheb (E1G1R) Rabbit mAb3,5-雙(三氟甲基)基異硫酯 豬痢疾短螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒鈣依賴性胞漿型脂酶A2(iPLA2)ELISA試劑盒Hemagglutinin (H2N2) 流感病毒血凝素抗體(H2N2)1 Kit 鈣衛蛋白ELISA試劑盒Histone H2A 組蛋白H2AX抗體300 ul 鈣網蛋白(CRT)ELISA試劑盒Phospho-Histone H2A.X (Ser139) 酸化組蛋白H2AX抗體100 ul 鈣聯蛋白(calnexin)ELISA試劑盒Histone H2B 組蛋白H2B抗體100 ul 鈣離子通道抗體(IgG)ELISA試劑盒Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗體100 ul 鈣結合蛋白S100A14 ELISA試劑盒Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗體100 ul 鈣結合蛋白S100A13 ELISA試劑盒Haase 透明質酸酶/玻璃酸酶抗體100 ul 鈣結合蛋白(CR)ELISA試劑盒HADHSC (human) 短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體()100 ul 鈣激活中性蛋白酶6(CAPN6)ELISA試劑盒HADHSC (rat, mouse) 短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體(,)100 ul |