熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)紫青霉探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Penicillium purpurogenum | 貨號 | YSP97061 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 含卷曲螺旋域蛋白80(CCDC80)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 棒曲霉 5g 熱休克蛋白47(HSP47)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 球孢白僵菌 100g 核纖層蛋白B1(LMNB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 金9401(金針菇) 25g 戴帽蛋白肌Z系β(CAPZβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 名稱 250ml 高爾基體蛋白A8家族成員A(GOLGA8A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黃柄曲霉 50ml 成纖維細胞生長因子5(FGF5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 黑曲霉 50mg 嵌套蛋白(NES)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 盾殼霉 1g 碳酸酐酶Ⅵ(CA6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 5g 透明質(zhì)酸合酶2(HAS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 斜臥青霉 25g 脯氨酸/精氨酸豐富端亮氨酸豐富重復蛋白(PRELP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希菌 5g 絲聚蛋白(FLG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 果蔬汁 三唑、、、 酰 1g 血小板反應蛋白解整合素金屬肽酶4(ADAMTS4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 細致交鏈孢 5g 肌營養(yǎng)不良蛋白關(guān)聯(lián)糖蛋白1(DAG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 熱帶假絲酵母 1g δ樣蛋白4(δLL4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希氏菌 250mg 含CUB域蛋白1(CDCP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 木葡萄球菌 5g Smad同源物3(Smad3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 滑菇 50mg 補體因子H相關(guān)蛋白3(CFHR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 淺綠黃假單胞菌 25g 角蛋白4(KRT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蜜二糖假絲酵母 5g 產(chǎn)紫青霉探針法熒光PCR檢測試劑盒霉素單克隆抗體GST-Tag proin 重組谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶300 ul CD98重鏈抗原抗體Cholesrol 膽固醇300 ul 鈣蛋白酶抑制蛋白抗體Have the biological activity Peptide products 有生物學活性的多肽產(chǎn)品300 ul cGMP依賴性蛋白激酶1抗體Beta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白)300 ul 胞漿鈣獨立脂酶A2抗體Beta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)300 ul 1號染色體開放閱讀框98抗體Beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)100 ul COX4NB蛋白抗體Beta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)(多肽蛋白)100 ul 腫瘤/抗原77抗體A Beta1-40 (mutation type, MT) peptide 突變型β淀粉樣肽1-40500 ul CD81抗體A Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40) β淀粉樣肽1-40(結(jié)構(gòu)改造)100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |