樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 馬鏈球菌馬亞種探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus equi subspecies equi | 貨號 | YSP97224 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 EDTA二鉀血液抗凝液 MAGEA11 ELISA Kit 100 ul EDTA三鉀血液抗凝液 MAGEA3(Melanoma-associated antigen 3) ELISA Kit 100 ul EDTA鈉血液抗凝液 MAGEA4 ELISA Kit 100 ul ACD血液抗凝液 MAGEA6 ELISA Kit 20 ul 肝素鈉血液抗凝液 MAGEA8 ELISA Kit 100 ul OXALATE(鈉鹽)血液抗凝液 MAGEB1 ELISA Kit 100 ul OXALATE(鉀鹽)血液抗凝液 MAGI1 ELISA Kit 100 ul OXALATE(氨鹽)血液抗凝液 MAGIX ELISA Kit 100 ug OXALATE(氨鉀鹽)血液抗凝液 MAGEB18 ELISA Kit 100 ul FLUORIDE血液抗凝液 MAGT1 ELISA Kit 100 ul OXALATE/FLUORIDE混合血液抗凝液 MAGOH ELISA Kit 100 ul 大量Lipofusin脂質體細胞轉染試劑盒 MAGEA8 ELISA Kit 100 ul 小量LipofusinX脂質體細胞轉染試劑盒 MAGEB1 ELISA Kit 100 ul 小量Sperfusin脂質體細胞轉染試劑盒 MAGEB18 ELISA Kit 1 Kit QuikFusin非脂質體細胞轉染試劑盒 MAGEB4 ELISA Kit 100 ul 重組腺病毒載體轉染試劑盒 LZTS2 ELISA Kit 100 ul 馬鏈球菌馬亞種探針法熒光PCR檢測試劑盒細絲蛋白2抗體TH1/TH2 細胞內細胞因子1 Kit 酸化細絲蛋白2抗體HLA-G 類白細胞抗原G100 ul 酸化FMS樣酪氨酸激酶3抗體CTGF 結締組織生長因子100 ul 肢體畸形相關蛋白FMN1抗體NPY(humen) 神經肽Y100 ul 二單加氧酶3抗體Ghrelin(Human) 腦腸肽100 ul 二單加氧酶5抗體Galectin-3(human) 半糖凝集素-3100 ul 酸化脆性X綜合征相關蛋白AFF1抗體MIP-1 Alpha 巨噬細胞炎性蛋白-1α100 ul 果糖-3激酶抗體MIP-1 Gamma 巨噬細胞炎性蛋白-1γ100 ul 甲精結合蛋白3抗體MIP-1 Beta 巨噬細胞炎性蛋白-1β10 mg |